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Evaluación del inhibidor de la glucólisis citrato-fluoruro y su aplicación en el diagnóstico de diabetes gestacional  
ARTÍCULO ORIGINAL  
Evaluación del inhibidor de la glucólisis citrato-fluoruro y  
su aplicación en el diagnóstico de diabetes gestacional  
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Fares Taie, S. ; Barbieri, D. ; Vilche Juarez, A. ; Bollati, M. ; Llui, E. ; Quiroga, S. ; Correa, V.  
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Instituto Universitario CEMIC (IUC). Valdenegro 4337, CABA, Argentina.  
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Departamento de Análisis Clínico, CEMIC. Galván 4102, CABA, Argentina.  
Contacto: Fares Taie, S.; mail: santiago@farestaie.com.ar  
Resumen  
La diabetes gestacional (DG) es una entidad que pone en riesgo la salud materna y fetal. Su pre-  
valencia varía en función de la población estudiada y del test de laboratorio utilizado, ya que no existe  
consenso nacional ni internacional sobre este punto. En todos los casos, el diagnóstico requiere de-  
terminaciones de glucemia plasmática en sangre venosa. Ha sido demostrado que el anticoagulante  
habitualmente utilizado, EDTA-fluoruro, no logra detener el proceso de glucólisis anaeróbica en las pri-  
meras horas post-extracción y que el citrato-fluoruro resulta un mejor inhibidor de la glucólisis. Esto  
aporta una nueva fuente de variabilidad al diagnóstico. Los objetivos del presente estudio fueron: a)  
comparar los resultados de glucosa plasmática obtenidos con diferentes inhibidores (heparina y baño  
de hielo, EDTA-fluoruro y citrato-fluoruro) procesados en diferentes tiempos; b) evaluar si la utiliza-  
ción de uno u otro inhibidor altera el diagnóstico de DG. Se recolectaron 190 muestras de adultos (no  
embarazadas) para efectuar la comparación y 312 muestras correspondientes a 52 pacientes em-  
barazadas para evaluar el diagnóstico de DG con los distintos anticoagulantes siguiendo el protocolo  
de IADPSG. Los resultados mostraron que el EDTA-fluoruro no mantiene constante la concentración de  
glucosa en el tiempo evaluado. El citrato-fluoruro logra una inhibición de la glucólisis comparable al  
tubo con heparina en baño de agua-hielo (gold standard). En la población de mujeres embarazadas, el  
inhibidor citrato-fluoruro reveló una mayor sensibilidad para el diagnóstico de DG. Por lo tanto, resulta  
imprescindible , estandarizar las pruebas y los valores de corte con este anticoagulante.  
Palabras clave: diabetes gestacional, prueba de tolerancia oral a la glucosa, inhibidor de glucólisis  
anaeróbica, citrato-fluoruro.  
Gestational diabetes (GD) is a pathological condition that threatens the maternal and fetal health.  
The prevalence depends on the population studied and the laboratory tests, as there is no national or  
international consensus on this point. Venous blood plasma glucose assay is required for diagnosis  
in all cases. EDTA-fluoride do not inhibit anaerobic glycolysis during the first two hours post blood-  
withdrawal and citrate-fluoride is a more efficient glycolysis inhibitor. This provides a new source  
of pre-analytical variability in the diagnosis. The aims of the present study were to: a) compare the  
results obtained with different plasma glucose inhibitors (Heparin in ice-water bath, EDTA-fluoride and  
citrate-fluoride) processed immediately and after 2 hours of incubation; b) assess whether the use of  
EDTA-fluoride or citrate-fluoride modifies GD diagnosis. One hundred and ninety adult samples were  
collected to reach objective “a” and 312 samples from 52 pregnant patients to assess the GD diagnosis  
following the IADPSG protocol. Results showed that EDTA-fluoride do not inhibit glycolysis efficiently  
during the evaluated time. Citrate-fluoride achieved a superior glycolysis inhibition, compared to  
heparin in ice-water bath (gold standard). Citrate-fluoride inhibitor showed a higher sensitivity for the  
diagnosis of GD. Therefore, it is essential to standardize the pre-analytical phase and the cut-off values  
for this inhibitor-anticoagulant.  
Abstract  
ISSN 1515-6761 Ed. Impresa  
ISSN 2250-5903 Ed. CD-ROM  
Código Bibliográfico: RByPC  
Fecha de Recepción:  
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2/08/2015  
Fecha de Aceptación:  
5/11/2015  
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Key words: gestational diabetes, glucose tolerance test, anaerobic glycolysis inhibitor, citrate-fluoride.  
ByPC 2016;80(1):10-16.  
Evaluación del inhibidor de la glucólisis citrato-fluoruro y su aplicación en el diagnóstico de diabetes gestacional  
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Introducción  
validación de los puntos de corte para cada sistema anti-  
La American Diabetes Association propone diversos es- coagulante-inhibidor de la glucólisis.  
tudios para el diagnóstico de diabetes mellitus que involu-  
Es por eso que los objetivos del presente trabajo fueron:  
cran mediciones de glucemia plasmática y hemoglobina comparar los resultados de glucosa en plasma obtenido  
glicosilada. Estas recomendaciones han alcanzado consen- de tubos con distintos inhibidores y diferentes tiempos de  
so internacional. No sucede lo mismo con el diagnóstico de contacto con el paquete globular: tubos con heparina (H)  
diabetes gestacional (DG), en el que aún se discute la defi- conservados en baño de agua-hielo hasta la separación del  
nición y los criterios diagnósticos.  
plasma, tubos con EDTA-fluoruro (F) y tubos con citrato-  
La DG es una entidad que pone en riesgo la salud mater- fluoruro (C). Paralelamente, se evaluó si la utilización de  
na y fetal. Su presencia se asocia con riesgos perinatales: uno u otro inhibidor (F o C) altera el diagnóstico de DG en las  
macrosomía, distocia de hombros, cesárea y preeclamsia. pacientes embarazadas que asistieron al laboratorio con  
Se ha demostrado, también, su asociación con riesgos futu- solicitud médica de prueba de tolerancia oral a la glucosa  
ros, como obesidad y diabetes en el niño y diabetes tipo II en según IADPSG.  
la madre, años después del embarazo. La prevalencia varía  
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de 1 a 14 % de los embarazos , en función de la población Materiales y métodos  
estudiada y del test de laboratorio utilizado, ya que no exis-  
Los anticoagulantes-Inhibidores de la glucólisis utiliza-  
te consenso nacional ni internacional sobre este punto. Los dos fueron F: EDTA-G, Wiener, solución equilibrada de sales  
criterios diagnósticos comúnmente usados son: WHO 1999, sódicas y potásicas de EDTA (0,274 mol/l) y fluoruro (0,86  
el que requiere una sobrecarga con 75 gramos de glucosa mol/l), pH 7,2.; C: Citrato 10mg%, fluoruro 0.8 M, pH=3,2 (pre-  
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y mediciones de glucemia basal y a las 2 horas . American parado en el laboratorio), H: tubos Vacutainer con heparina  
Congress of Obstetricians and Gynecologists propone una sódica 68 USP Becton & Dickinson en baño de agua-hielo.  
sobrecarga con 100g de glucosa y mediciones de glucemia  
Todas las mediciones se realizaron en un único instru-  
basal, a los 60, 120 y 180 minutos . Canadian Diabetes As- mento, Cobas 6000, módulo C 501, con reactivo dedicado  
sociation utiliza una sobrecarga con 75 gramos de glucosa Hexoquinasa (Roche Diagnostics). Precisión intermedia  
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y mediciones basal, a los 60 y 120 minutos . Internatio- 0.92 % para glucemias de valor medio 81 mg/dl y 0.98 % para  
nal Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups glucemias de valor medio 288 mg/dl.  
(
IADPSG) propone el mismo desafío que Canadian Diabetes  
Análisis de Datos: El análisis estadístico se realizó con el  
Association pero con valores de corte diferentes . En todos programa Medcalc 11.3.0 y IBM SPSS Statistics 21.0.  
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los casos, el diagnóstico requiere determinaciones de glu-  
cemia plasmática en sangre venosa.  
Experimento A: con el fin de evaluar la eficacia inhibitoria  
de la vía glucolítica de F y C frente al gold standard H se ex-  
Ha sido demostrado que el anticoagulante habitualmen- trajo sangre a 28 adultos voluntarios (rango etario: 25 – 51  
te usado en los laboratorios clínicos, EDTA-FLORURO, no lo- años; media 35 años), tres tubos por paciente (H, F y C), en  
gra detener el proceso de glucólisis anaeróbica en las pri- ayunas o postprandial (con el fin de obtener resultados más  
meras horas post-extracción, ya que inhibe la Enolasa, una elevados de glucemia). Las muestras se fraccionaron en  
de las últimas enzimas de la vía glucolítica. Actualmente se dos alícuotas. A la primera, se le separó el plasma por centri-  
propone7 citrato-fluoruro como mejor inhibidor de la glucó- fugación y se midió la glucemia inmediatamente luego de la  
,8  
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lisis, porque actuaría sobre las enzimas Hexoquinasa y Fos- extracción (H 0, F 0 y C 0). La segunda se mantuvo en con-  
fofructoquinasa-1, activas en el inicio de la ruta glucolítica. tacto con el paquete globular durante dos horas (H en baño  
Estas enzimas alcanzan un máximo de actividad a pH 8, no de agua-hielo; F y C a temperatura ambiente). Cumplido el  
observándose actividad de las mismas a pH menor de 7. El tiempo estipulado, se separó el plasma por centrifugación  
rol del aditivo Citrato/Ácido Cítirico es justamente disminuir (H en centrífuga refrigerada, a 4ºC) y se midió la glucemia  
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,8  
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el pH por debajo de 7 para inhibir la actividad enzimática  
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(H 2, F 2 y C 2).  
Se ha reportado que con este inhibidor se logran resulta-  
Experimento B: para analizar la diferencia de resultados  
dos similares a los obtenidos cuando se extrae sangre con entre EDTA-fluoruro y citrato-fluoruro se extrajo sangre a  
heparina y se colocan los tubos en baño de agua- hielo, se- 53 pacientes adultos en tubos F y C (rango etario: 27 – 53  
parándose los plasmas antes de las dos horas. Este último años; media 33 años). Rango de concentración de las mues-  
método se considera gold standard, aunque es muy poco tras: 59 – 144 mg/dl. Todos los plasmas se procesaron por  
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duplicado inmediatamente (F 0, C 0) y luego de dos horas  
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utilizado ya que resulta de muy difícil implementación.  
Esta alternativa pre-analítica aporta una nueva fuente de de contacto con el paquete globular (F 2, C 2), también por  
variabilidad al diagnóstico de DG, ya que con los distintos duplicado.  
anticoagulantes-inhibidores se obtienen resultados de glu-  
Experimento C: con el fin de evaluar la influencia del inhibi-  
cemia diferentes. El diagnóstico de DG no sólo dependerá de dor glucolítico en el diagnóstico de DG se recolectaron mues-  
la sensibilidad del test seleccionado, sino también del sis- tras con ambos inhibidores, EDTA-fluoruro y citrato-fluoruro,  
tema anticoagulante-inhibidor de glucólisis utilizado. Sería de 52 pacientes embarazadas que acudieron al laboratorio  
necesario una estandarización de la fase pre-analítica y/o para realizar la prueba de tolerancia oral a la glucosa, según  
ByPC 2016;80(1):10-16.