Guía práctica para la evaluación del semen  
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GUÍA PRÁCTICA  
Guía práctica para la evaluación del semen  
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Ariagno, Julia ; Mormandi, Edaurdo  
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Laboratorio de Fertilidad Masculina, Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad  
de Buenos Aires (UBA). Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.  
Laboratorio de Endocrinología, Grupo de Reproducción Humana, División Endocrinología, Hospital Carlos G. Durand. Ciudad  
Autónoma de Buenos Aires, Argentina.  
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Contacto: Eduardo Mormandi. E-mail: androsite@gmail.com  
El espermograma es un examen de laboratorio esencial en la evaluación de la infertilidad para el  
Resumen  
estudio de las enfermedades genitales masculinas y de otras patologías, como las provocadas por la  
exposición a productos químicos, factores ambientales y medicamentos, entre otras causas.  
El análisis del semen o espermograma incluye la evaluación de los espermatozoides, el plasma  
seminal y la presencia de otras células como leucocitos y células de la línea germinal .También, aporta  
información importante en cuanto al proceso de espermatogénesis, la función de los espermatozoides  
y de las glándulas anexas. Se evalúan las características generales del semen tanto macroscópicas:  
color y aspecto, viscosidad, licuefacción y volumen, como así también parámetros microscópicos,  
tales como número de espermatozoides, movilidad, morfología y vitalidad.  
Se debe realizar un control de calidad riguroso que garantice reproducir de los resultados y minimice  
los errores inter e intra-observador.  
Esta guía da los lineamientos esenciales para la realización de una correcta evaluación del semen  
humano, de acuerdo con las normativas de la Organización Mundial de la Salud.  
Palabras claves: espermática, unfertilidad, morfologías, recomendaciones.  
Abstract Semen analysis is an essential laboratory test in the evaluation of infertility for the study of male  
genital diseases and other diseases such as those caused by exposure to chemicals, environmental  
factors and drugs. Semen analysis includes assessing sperm, seminal plasma and the presence of  
other cells such as leukocytes and germ line cells. This analysis provides important information on  
the process of spermatogenesis, sperm function and function of annex glands. This analysis includes  
both a macroscopic examination (color, appearance, viscosity, liquefaction and volume of semen) and  
ISSN 1515-6761 Ed. Impresa a microscopic examination (sperm count, motility, morphology and vitality). A rigorous quality control  
ISSN 2250-5903 Ed. CD-ROM  
Código Bibliográfico: RByPC  
should also be made to ensure the reproducibility of the results and minimize inter- and intra-observer  
Fecha de Recepción:  
4/02/2015  
Fecha de Aceptación:  
9/04/2016  
errors. This guide provides the essential guidelines to conduct a proper assessment of human semen  
according to the regulations of the World Health Organization.  
Key words: spermatic, infertility, morphology, recommendations  
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Introducción  
Materiales y Método  
Análisis del semen  
Etapa pre-analítica  
Uno de los principales factores relacionados con la fertilidad  
Preparación del paciente y toma de muestra:  
es la producción espermática, que se valora mediante el es- De acuerdo con las recomendaciones del Manual de Labora-  
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permograma. El mismo consiste en la evaluación macroscó- torio para el estudio del semen de la OMS – 2010 , la mues-  
pica y microscópica del semen.  
tra para el espermograma se debe tomar según las siguien-  
Lamentablemente la gran variabilidad intraindividual de tes normativas:  
los parámetros del semen, limita la utilidad de este estudio 1- El paciente debe recoger la muestra luego de 2 días y  
dado que, muestras recogidas por un mismo individuo, bajo  
las mismas condiciones y con el mismo período de absti-  
no más de 5 de abstinencia sexual previa al examen  
(no mantendrá relaciones sexuales ni se masturbará).  
nencia, pueden mostrar variaciones en todos los paráme- 2- Lo ideal es que la muestra se recoja en la intimidad de  
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tros , por lo que se sugiere realizar por lo menos dos esper-  
una dependencia próxima al laboratorio para que sea  
procesada rápidamente. De lo contrario, deberá ser  
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, 3  
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mogramas antes de arribar a un diagnóstico definitivo  
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trasladada al laboratorio antes de transcurrida una completa o incompleta después de este tiempo.  
hora de la recolección y se la protegerá de las tempe-  
raturas extremas (no menor de 20°C ni mayor de 37°C) D. Volumen  
durante el traslado al laboratorio.  
Las glándulas accesorias que más contribuyen al volumen  
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-
La muestra deberá obtenerse mediante masturbación del eyaculado son las vesículas seminales y la próstata,  
y eyacularse dentro de un recipiente pequeño, limpio, mientras que las glándulas bulbouretrales de Cowper, las  
de vidrio o plástico y de boca ancha. El mismo, de ser glándulas uretrales de Litre y el epidídimo aportan una pe-  
posible, deberá estar tibio para reducir el riesgo de queña fracción.  
shock por frío.  
La OMS recomienda informar los parámetros del semen en  
Cuando por circunstancias especiales no sea posible el total del eyaculado por lo que la medida precisa del volu-  
obtener el semen mediante masturbación, se podrá men es esencial.  
utilizar un condón de plástico inerte específico para Los métodos recomendados para la medición del volumen  
este fin (colector seminal). El coitus interruptus no es son:  
aceptable para hacer la recolección del semen porque Por pesada: se debe recoger el semen en un frasco pre pe-  
puede perderse la primera porción del eyaculado que sado y luego se lo vuelve a pesar con el semen, dado que  
contiene la mayor concentración de espermatozoides. la densidad del semen es aproximadamente 1g/ml, el peso  
Además, puede existir contaminación vaginal (células, obtenido será igual al volumen de semen en ml.  
bacterias) y el pH ácido vaginal ejerce un efecto adver- El valor de de referencia es ≥ 1.5 m.  
so sobre la motilidad de los espermatozoides.  
5-  
Las muestras incompletas no se deben analizar, pero E. Viscosidad  
en aquellos casos tales como: dificultades psicológi- Para su estimación se pueden utilizar dos métodos:  
cas, imposibilidad de repetir el estudio, problemas físi-  
cos, y otras circunstancias que así lo ameriten, se pro-  
cesará la muestra y se informará al médico lo ocurrido.  
•
•
El más sencillo y recomendable consiste en recoger la  
muestra con pipeta Pasteur de plástico y dejar caer gota  
a gota.  
También puede hacerse introduciendo una varilla de vi-  
drio en la muestra y observar el filamento que forma al  
retirarla.  
Las muestras de semen se deben analizar dentro de la pri-  
mera hora después de su recolección.  
Etapa analítica  
En cualquiera de los dos métodos se considera anormal  
cuando se forma un filamento de más de 2 cm, mientras que  
en una muestra normal, la caída debe ser gota a gota.  
No hay que confundir una muestra viscosa con una mues-  
Evaluación macroscópica:  
A. Color  
El color normal del semen licuado es gris claro (blanqueci- tra no licuada. El aspecto de la muestra puede ser líquido,  
no), pudiendo presentar otros colores debido a situaciones homogéneo y luego hacer un gran filamento cuando la reco-  
patológicas: leucocitospermia (amarillento), hemospermia gemos con pipeta Pasteur, en este caso nos encontramos  
(rojizo/amarronado) o colores varios por la ingesta de dro- frente a una muestra muy viscosa. El resultado es normal o  
gas o vitaminas.  
aumentada.  
B. Aspecto  
F. pH  
El aspecto del semen da idea de la cantidad de células que El pH del semen refleja el equilibrio entre los valores de pH  
tiene en suspensión, y se relaciona directamente con el vo- de las diferentes secreciones de las glándulas accesorias,  
lumen de eyaculado, por lo que frente a grandes volúmenes principalmente la secreción de vesícula seminal alcalina y  
podrá presentar un aspecto menos opaco o viceversa.  
la secreción ácida prostática. El pH debe medirse cuando  
Normalmente el semen tiene aspecto opalescente u opaco. el semen está licuado en un tiempo estandarizado, prefe-  
rentemente después de 30 minutos de obtenido, de no ser  
C. Licuefacción  
posible se medirá dentro de la hora de la eyaculación.  
El semen coagula casi inmediatamente después de su eya- El pH del semen aumenta normalmente con el tiempo por la  
culación para nuevamente licuarse entre 5 y 40 minutos pérdida de CO que se produce luego de la eyaculación, por  
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después, por la acción del antígeno próstata-específico, lo que los valores altos de pH proporcionan poca informa-  
pero dado que su traslado puede demorarse hasta 1 hora, ción de utilidad clínica si no fue determinado rápidamente.  
la OMS sugiere que todas las muestras sean evaluadas a los Si el pH es inferior a 7,0 en una muestra de semen con un vo-  
60 minutos post obtención.  
lumen bajo y bajo número de espermatozoides, puede haber  
En caso de no licuar a los 60 min se observarán en la mues- obstrucción del conducto eyaculador o frente a muestras  
tra, coágulos gelatinosos de diversos tamaños en los que azoospérmicas tratarse de ausencia bilateral congénita de  
los espermatozoides se encontrarán inmóviles. El resulta- los conductos deferentes, condición en la que las vesículas  
do puede ser normal o anormal, o expresado de otra forma seminales tampoco están presentes.  
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Se debe medir con papel de pH de rango reducido de 6,0 a  
0,0 con buena discriminación entre valores de 7,0 a 8,5.  
Figura 1: Cámara Cell-vu  
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El procedimiento consiste en:  
•
•
Mezclar bien la muestra de semen.  
Extender una gota de semen de manera uniforme sobre  
el papel de pH.  
•
Esperar a que el color de la zona impregnada se encuen-  
tre uniforme (30seg). El valor de referencia es ≥ 7,2  
Evaluación en fresco del semen:  
Como ya se mencionó el semen debe estudiarse dentro de  
un periodo de tiempo determinado y con condiciones de  
temperatura precisas, con el fin de asemejar las condicio-  
nes fisiológicas y para poder evaluar posibles desviaciones  
de la muestra respecto de los valores de referencia estable-  
cidos por la OMS.  
En el análisis microscópico inicial se debe valorar la presen-  
cia de células no espermatozoides, leucocitos, filamentos  
de moco, cristales (fosfato de espermina), hematíes, es-  
permatozoides agrupados y otros elementos (Trichomonas  
vaginalis, levaduras, etc.).  
Evaluación microscópica del semen:  
Se debe efectuar una primera observación a bajo aumento  
El análisis microscópico del semen permite la evaluación de  
la movilidad, la vitalidad, la concentración y la morfología de  
los espermatozoides, a la vez que se investiga la presencia  
de células y/o elementos acompañantes diferentes de es-  
permatozoides, como los leucocitos, células de la progenie  
espermática, células inflamatorias, bacterias y cristales.  
Al igual que con todos los analitos analizados en el laborato-  
rio, la metodología a emplear en esta evaluación debe estar  
estandarizada para asegurar así que todas las muestras  
sean evaluadas de misma forma.  
(
100x: lente objetivo de 10x y ocular de 10x) con el fin de  
visualizar fibras de moco, coágulos, espermatozoides agru-  
pados y luego se debe pasar a una magnificación de 400x  
donde se realizará la clasificación de la movilidad esper-  
mática y de los diferentes elementos presentes estimando  
además el número de espermatozoides por campo para la  
determinación de la concentración espermática.  
Todos los parámetros microscópicos se deben procesar por  
duplicado, o sea en 2 alícuotas diferentes de la muestra.  
Este procedimiento se realiza para minimizar las posibles  
diferencias debidas a la heterogeneidad propia del semen.  
Análisis microscópico inicial:  
Luego de la evaluación macroscópica se homogeniza bien  
la muestra con pipeta Pasteur (la homogenización no debe  
ser tan vigorosa que genere burbujas, porque éstas dificul-  
tan la visualización) y se dispensa con pipeta automática  
un volumen tal de obtener una cámara entre porta y cubre-  
objetos de alrededor de 20 µm de profundidad, la cual ga-  
rantiza el movimiento libre de los espermatozoides, a la vez  
que se distribuirán en monocapa, por lo que no se observa-  
rán diferentes planos microscópicos, como ocurre al utilizar  
un mayor volumen. Para lograr dicha cámara, de emplear  
cubreobjetos de 22x22mm se deben dispensar 10 µl, con  
cubreobjetos de 24x24mm dispensar 12µ y con cubreobje-  
tos de 18x18mm dispensar 7µl.  
Existen en el mercado cámaras para la evaluación del se-  
men tales como CELL-VU® slide con las que se puede evaluar  
tanto la movilidad como la concentración espermática sin  
diluir la muestra. Cada portaobjetos-cámara cuenta con dos  
posiciones (cámaras), facilitando la evaluación por duplica-  
do, cada uno con una profundidad de 20 µm.  
Aceptación o rechazo de los duplicados (tabla válida para  
movilidad, vitalidad y morfología)  
Como ya se mencionó, todas las determinaciones que se in-  
forman en forma porcentual se deben realizar por duplicado  
y se informa el promedio.  
Se aceptaran los duplicados y se informara el promedio, si la  
diferencia entre ambos datos es menor o igual al valor límite  
que indica la tabla 1 para cada valor de promedio.  
Si la diferencia entre porcentajes es mayor a la admitida,  
debido a errores al contar, se deben descartar los 2 porcen-  
tajes y rehacer con nuevas alícuotas.  
Una vez aceptados los promedios se informará:  
•
•
•
% de espermatozoides con movilidad progresiva (PR)  
% de espermatozoides con movilidad no progresiva (NP)  
% de espermatozoides inmóviles (IM)  
Los valores de referencia son:  
•
•
Móviles totales (PR+NP): ≥ 40%  
Móviles progresivos (PR): ≥ 32%  
Estas cámaras se cargan con aproximadamente 4 µl de se-  
men.  
La estimación de la cantidad de espermatozoides presen-  
tes para decidir la dilución a realizar para el recuento esper-  
mático puede observarse en la tabla 2.  
(Figura 1)  
En el extendido fresco antes descripto se estima el número  
de espermatozoides presentes por campo (400x), se deben  
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evaluar varios campos y promediar las observaciones.  
miento de cada sistema y platina termostatizada a 37 °C.  
Como se describió previamente la observación microscópi- - Software: programa informático compuesto por distintos  
ca inicial se realiza en una cámara cuya altura es 20µm y a módulos: movilidad, concentración, morfología, base de  
400x, lo que determina que el volumen de cada campo sea datos e informes. Sin embargo, el uso de sistemas CASA pre-  
aproximadamente de 4nl (diámetro aproximado del campo senta algunos inconvenientes:  
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microscópico: 500µm) , por lo cual al contar la cantidad de Se puede tender a una sobreestimación de la concentración  
espermatozoides presentes por campo se tendrá una idea espermática, debido a que el software puede contabilizar el  
aproximada de la concentración espermática de la muestra. mismo espermatozoide dos veces por las colisiones esper-  
máticas. Esta sobrestimación se produce en menor medida  
CASA (Computer Assisted Semen Análisis)  
cuanto más diluida este la muestra, ya que disminuyen las  
El método estándar para evaluar la motilidad espermática colisiones.  
ha sido y sigue siendo la clasificación subjetiva de los esper- Algunos equipos como el SCA® (Sperm Class Analyzer, Mi-  
matozoides en el semen. Este método sin embargo, es obje- croptic S.L., Barcelona, España), permiten al operador cam-  
to de gran variación inter-laboratorios. La introducción del biar las condiciones de medida y otorgar validez a las imá-  
análisis de semen asistido por computadora (CASA= Compu- genes digitales.  
ter Assisted Semen Analysis) ha permitido una más objetiva No existe una estandarización y optimización de los equi-  
y sofisticada evaluación de la movilidad. La técnica CASA tie- pos y de los procedimientos utilizados en los análisis.  
ne la ventaja de aumentar la precisión y reproducción de las Cada laboratorio utiliza un equipo diferente, con diferentes  
mediciones de movilidad espermática y permite conservar características técnicas que dan lugar a resultados muy  
la video-documentación de las muestras analizadas.  
Los sistemas CASA están integrados por los siguientes com- A los resultados les afectan diferentes factores como la  
ponentes: temperatura de la muestra, volumen, tipo de cámara, con-  
Hardware: ordenador (PC), cámara de video, microscopio óp- centración de la muestra como así también cuestiones vin-  
dispares entre centros.  
-
tico de contraste de fase positivo o negativo según el requeri- culadas al suministro eléctrico que condicionan la tensión  
que llega al equipo. Por ello, es necesario que cada equipo  
Tabla 1: Diferencias aceptables entre dos porcentajes  
según el promedio entre ambos para intervalos de  
confianza del 95%  
estandarice un protocolo, sabiendo que los resultados se-  
rán únicamente aplicables a muestras evaluadas con el  
equipo en cuestión.  
Salvando los inconvenientes, el CASA es el mejor sistema  
para un análisis preciso y rápido de una muestra de semen .  
Promedio (%)  
Diferencia aceptable  
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1
2
3
4
5
6
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8
9
10  
9
8
7
6
5
4
3
2
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Test de vitalidad  
La OMS indica que el test de vitalidad debe realizarse de for-  
ma rutinaria a todas las muestras y considera que es parti-  
cularmente importante cuando la movilidad progresiva de la  
muestra es menor de 40%.  
El estudio de vitalidad se realizar empleando colorantes su-  
pra vitales denominados así, porque penetran en las célu-  
las cuya membrana plasmática está dañada, por lo que los  
espermatozoides muertos estarán coloreados y los vivos se  
verán sin colorante sean móviles o inmóviles.  
Se basa en que los colorantes no pueden atravesar una  
membrana plasmática estructuralmente intacta, de tal for-  
ma que un espermatozoide vivo será aquel cuyo núcleo no